Fisher细胞爬片的组织取材与制作方法

1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后固定。

2、组织取材注意事项：

（1）标本新鲜：组织要求离体后30min~2h内浸入固定液，尤其是开展分子生物学工作。动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。

（2）注意防止人为因素的影响刀和剪要快，避免挤压。

（3）组织块的大小 厚为0.1~0.3cm，大小可根据需要而定。

Fisher细胞爬片的制作方法

1.爬片可用一般的盖玻片，也可用爬片。

2.应用盖玻片，可根据自己的需要剪裁成合适的大小，以备置于6孔板、12孔板或24孔板；裁剪时可用前护士输液用于打开玻璃安瓶的小沙轮，或者是口腔科的那种小沙轮，轻轻划一下后，稍用力一掰就分开了。如果接种大皿的话，一般不将盖玻片切开，直接清洁后放入培养皿中，到染色时再将之切开，这样既保证了细胞均一性，又可同时做几个指标的染色。

3.将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再置于无水酒清中浸泡6小时，再用三蒸水冲洗3遍，放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后进行高压消毒。

4.高压后取出放入烤箱中烤干，备用。烤干后可放入超净台中。

5.关于多聚赖氨酸，很多人都将玻片用此处理，以使细胞与玻片结合更牢。但我在做爬片时从来没用过多聚赖氨酸，细胞贴壁仍然很好，且在做后续的免疫细胞化学染色、tunel等凋亡检测、免疫荧光等也从未脱过片。